嘉美生物是一家主要从事Annexin V,信号转导抗体,重组人和动物蛋白,磷酸化抗体,各种动物ELISA试剂盒,生物实验服务等研发与销售的高科技生物公司,免费热线:400-698-4168。
作者:嘉美生物 发表时间:2012/2/26 阅读次数:2660(次)
怎样合理地进行Annexin V 凋亡检测
用流式检测凋亡时,PI受时间的影响很大,因标记了PI后会加大细胞毒性,随着时间延长会导致PI的染色增加,特别是检测早期凋亡时,如果时间延长 除了会导致在流式细胞仪上的细胞分群差距加大外,误差会明显加大。一般的说明书都会标明,PI在上机前5分钟加,然后在一个小时内检测。
一般每组实验一次可以先做三个复孔,上机前5分钟加PI,最好在半小时内检测完毕。这时可以先分析下三个复孔的差异。等待摸索的实验条件成熟后,每组实验一次可以做6~8个复孔,然后做统计学分析。
严格说来,当做出统计学差异时,这样的实验还要重复三次。但是因检测凋亡时,受细胞状态,PI染色时间,流式检测时间,以及每次实验时的误差等的影 响外,很难保证能够完全重复出上次的结果,甚至即使在保证了实验条件几乎相同的情况下,每次重复的差异也会出现加大的情况。这时可以适当重复2~3次,尽 量使差异减小。
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